耐万古霉素肠球菌vanA/vanB双重PCR试剂盒

耐万古霉素肠球菌vanA/vanB双重PCR试剂盒

英文名称：Vancomycin-Resistant Enterococcus(VRE)

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-3周

其他： 

产品介绍

产品及特点

耐万古霉素肠球菌（Vancomycin-Resistant Enterococcus，VRE）， 又名万古霉素抗药性肠球菌，是肠球菌属下的一种细菌，有着对万古霉素这种 抗生素的抗药性。在肠球菌属中，对人类有着病原性的有粪肠球菌及屎肠球菌。 而所有屎肠球菌更是有着抗药性的，亦即所有屎肠球菌都是 VRE。肠球菌属的 细菌主要是在肠内，亦可以在人类的消化道及尿道内发现。VRE 特别对免疫系 统受损的人有危险性，但是它令健康的人受感染则较少见。一般来说可以引起 心内膜炎、败血病及尿道感染等病症。因此快速灵敏检测耐万古霉素肠球菌 vanA/vanB 基因型具有重要意义。本产品就是为此目的根据 PCR 原理开发的 试剂盒，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。

2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增耐万古霉素肠球菌 vanA/vanB 基 因型，与其他微生物没有交叉反应。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。

5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。

自备试剂 样品 DNA。

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取 试剂盒兼容。

2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和 一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是PCR阳性对照的10000倍稀 释液，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放 冰上待用。

二、设置 PCR 反应（40μL 体系）

3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分 N+2 个 样品管 PCR 阴性 对照 PCR 阳性 对照

PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL

耐 万 古 霉 素 肠 球 菌vanA/vanB双重PCR 引物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL

N+2 个样品 DNA 模板 各 18 μL - -

PCR 阴性对照（水） - 18 μL -

PCR 阳性对照（耐万古霉 素肠球菌vanA/vanB 双重PCR阳 性对 照 的 10000倍稀释液） - - 18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程 温度 时间

预变性 94℃ 5 min

PCR 反应 （35 个循环） 94℃ 1 min 54℃ 1 min 72℃ 70 sec

最后延伸 72℃ 10 min

三、电泳检测

5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物阳性对照必须有 vanA 1030bp 和 vanB 433bp 条带出现，阴性对 照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。