马媾疫锥虫PCR试剂盒

马媾疫锥虫PCR试剂盒

英文名称：Trypanosoma equiperdum

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-3周

 其他：

产品介绍：

产品及特点

马媾疫是马媾疫锥虫寄生于马属动物的生殖器官引起的一种寄生虫病。以外 生殖器炎症、水肿、皮肤轮状丘疹和后躯麻痹为特征。0IE 将其列为 B 类动物 疫病。仅马属动物对媾疫锥虫易感，主要在生殖器官黏膜寄生，通过病畜与健 康畜交配感染，幼畜可经乳汁感染，也可通过未经严格消毒的人工授精器械、 用具等传染。媾疫锥虫侵入公马尿道或母马阴道黏膜后，在黏膜上进行繁殖， 引起局部炎症。病马屡配不孕，或妊娠后易流产。本试剂盒是根据 PCR 原理 开发，具有下列特点：

1. 免 DNA 制备，直接用裂解液做 PCR，更加简单快捷。

2. 根据马媾疫锥虫保守区设计引物。

3. 特异性高，跟其他微生物无交叉反应。

4. 灵敏高，可检测低至几个拷贝/反应的支原体污染。

5. 提供内参和无感染性的支原体阳性对照（DNA 片段），能有效避免实验结 果的假阳性和假阴性。

6. 可用于培养细胞、疫苗、血清、重组蛋白和耗材的污染检测。但不能用于 临床诊断。

7. 本产品足够至少 50 次 40μL 体系 PCR 检测(含阳性对照和阴性对照反应)。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。

自备试剂 样品 DNA。

使用方法 一、样品 DNA 的制备 1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取 试剂盒兼容。

2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和 一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要 求的样品起始量）中加 10μL 鞭虫通用 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液 而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放 冰上待用。

二、设置 PCR 反应（40μL 体系）

3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分 N+2 个 样品管 PCR 阴性 对照 PCR 阳性 对照

PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL

鞭虫通用 PCR 引物混合 液 各 2 μL 2 μL 2 μL

N+2 个样品 DNA 模板 各 18 μL - -

PCR 阴性对照（水） - 18 μL -

PCR 阳性对照（鞭虫通用 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液） - - 18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程 温度 时间

预变性 95℃ 5 min

PCR 反应 （35 个循环） 95℃ 15 sec 57℃ 15 sec 72℃ 40 sec

最后延伸 72℃ 10 min

三、电泳检测

5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物 阳性对照必须有预期条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。 对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑 制剂的感染。