鸡白痢沙门氏菌PCR试剂盒

鸡白痢沙门氏菌PCR试剂盒

英文名称：Salmonella pullorum

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-3周

 其他：

产品介绍：

产品及特点

鸡白痢沙门氏菌（Salmonella pullorum）是一种急性、系统性疾病，主 要危害 1 周龄以内雏鸡，造成高死亡率；成年鸡无明显病变，多数呈隐形感染。 鸡白痢沙门氏菌病的潜伏期短，雏鸡一般为 2—3 天，有时仅为 1 天。出壳后 第 2 天就开始死亡，病鸡精神萎顿，缩头颈，闭眼昏睡，绒毛松乱，初期病鸡 仅表现食欲减少，继而不食；腹泻，排白色稀浆样粪便，有糊堵肛门现象；严 重者因呼吸困难或急性败血症而死亡。因此快速灵敏检测鸡白痢沙门氏菌具有 重要意义。本产品就是为此目的根据 PCR 原理开发的试剂盒，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。

2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增鸡伤寒沙门氏菌，与其他微生物没 有交叉反应。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。

5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。

自备试剂 样品 DNA。

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取 试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 20 次核酸释放剂试用装

2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和 一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要 求的样品起始量）中加 10μL 鸡伤寒沙门氏菌 PCR 阳性对照的 1000 倍稀 释液而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。

二、设置 PCR 反应（40μL 体系）

3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分 N+2 个 样品管 PCR 阴性 对照 PCR 阳性 对照

PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL

鸡伤寒沙门氏菌 PCR 引 物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL

N+2 个样品 DNA 模板 各 18 μL - -

PCR 阴性对照（水） - 18 μL -

PCR 阳性对照（鸡伤寒沙 门氏菌 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液） - - 18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程 温度 时间

预变性 95℃ 5 min

PCR 反应 （35 个循环） 95℃ 15 sec 57℃ 15 sec 72℃ 40 sec

最后延伸 72℃ 10 min

三、电泳检测

5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物阳性对照必须有条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。 对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑 制剂的感染。