变形杆菌属通用PCR试剂盒

变形杆菌属通用PCR试剂盒

英文名称：Proteus spp.

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-3周

其他：

产品介绍：

产品及特点

变形杆菌（Proteus spp.）是人和动物的寄生菌和病原菌，广泛分布在自 然界中，如土壤、水、垃圾、腐败有机物及人或动物的肠道内。变形杆菌一般 不致病。夏、秋季节温度高，变形杆菌在被污染的食品中大量繁殖，如食用前 未彻底加热，其产生的毒素可引起中毒。进食后 2~30 小时出现上腹部刀绞样 痛和急性腹泻，伴有恶心、呕吐、头痛、发热。病程较短，一般 1~3 天可恢复， 很少有死亡。中毒食品主要以动物性食品为主，其次为豆制品和凉拌菜，发病 季节多在夏、秋，中毒原因为被污染食品在食用前未彻底加热，变形杆菌食物 中毒是我国常见的食物中毒之一。因此快速灵敏检测变形杆菌具有重要的意义， 本试剂盒就是为此目的根据 PCR 原理开发，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供细菌 DNA 模板。

2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增变形杆菌属通用，跟其他微生物无 交叉反应。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。

5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次。

6. 本产品只能用于科研

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。

自备试剂 样品 DNA。

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳 性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 阳性对照的 100 倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作 为 PC。另外用水作为 NC。

2. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数细菌 DNA 提取试 剂盒兼容。也可以选购本公司的细菌 DNAout 或柱式细菌 DNAout。本试 剂盒免费赠送 20 次免 DNA 提取的核酸释放剂，本产品的裂解液可 以直接作为 PCR 模板，省略了 DNA 提取步骤。

二、设置 PCR 反应（40 μL 体系）

3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分 N+2 个 样品管 PCR 阴性 对照

PCR 阳性 对照 PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL

变形杆菌属通用 PCR 引物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL

N+2 个样品 DNA 模板 各 18 μL - -

样品制备阴性对照（超纯水） - 18 μL -

样品制备阳性对照（变形杆菌属 通用阳性对照的 100 倍稀释液） - - 18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程 温度 时间

预变性 95℃ 5 min

PCR 反应 （35 个循环） 95℃ 15 sec 55℃ 15 sec 72℃ 60 sec

最后延伸 72℃ 10 min

三、电泳检测

5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 541bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩 增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。