猪札如病毒(札幌病毒)RT-PCR试剂盒

猪札如病毒(札幌病毒)RT-PCR试剂盒

英文名称：Porcine Sapovirus(PoSaV)

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-3周

其他： 

产品介绍：

产品及特点

札幌病毒（也称札如病毒）归属于嵌杯病毒科札幌样病毒属，最初于 1977 年在日本札幌通过电镜进行检测被发现。与诺沃客病毒类似，均属于人类杯状病 毒，是非细菌性急性胃肠炎的主要病原体之一，可感染人和动物引发肠胃炎。因 此灵敏快捷的诊断产品具有重要的意义。本产品根据 PCR 原理开发，可用于科 研领域快速检测猪札如病毒。它具有下列特点：

1. 一站式，用于不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。

2. 根据猪札如病毒的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。

3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。

4. 使用一管式 RT-PCR 技术，RT 和 PCR 两步在一个试管内完成，不需要中间 转移样品，降低了操作误差和可能的污染。

5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR。

6. 本产品只能用于科研，不能用于临床。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分 分开放置，因为其容易污染其他成分，造成假阳性。

自备试剂 样品 RNA

使用方法 一、样品 RNA 的制备

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性 对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用猪札如病毒 PCR 阳性对 照的 1000 倍稀释液作为制备的阳性对照。可以用水作为制备的阴性对照。 制备所得成为样品 RNA。

2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提 取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 20 次核酸释放剂试用装，

二、设置 RT-PCR 反应（20μL 体系）

3. 如果有 N+2 个样品，则标记 N+4 个 PCR 管（额外增加的两个管一个是 RT-PCR 阳性对照，另一个是 RT-PCR 阴性对照）并按照下表在 PCR 管中 加入下列成分：

成份 N+2 个 样品管 RT-PCR 阴性对照 RT-PCR 阳性对照

5×双酶一管式 RT-PCR Buffer 各 4 μL 4 μL 4 μL

猪札如病毒 RT-PCR 引物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL

N+2 个制备的 RNA 样品 各 12.5 μL - -

超纯水 - 12.5 μL -

猪札如病毒 RT-PCR 阳性对照 的 1000 倍稀释液 - - 12.5 μL

MMLV-Taq Mix 1.5 μL 1.5 μL 1.5 μL

4. 上机进行 RT-PCR，RT-PCR 反应参数为:

过程 温度 时间

逆转录 42℃ 30 min

预变性 95℃ 5 min

PCR 反应 （35 个循环） 95℃ 30 sec 59℃ 30 sec 72℃ 30 sec

延伸 72℃ 7 min

5. 琼脂糖电泳检测扩增效果。如果阴性对照有扩增产物或阳性对照无扩增产物， 则说明实验失败，需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有扩增产物、 阳性对照有扩增产物的情况下，才有必要分析样品的实验结果。预期的 PCR 产物如果有扩增则为阳性，如果无则为阴性。