猪圆环病毒3型LAMP试剂盒

猪圆环病毒3型LAMP试剂盒

英文名称：Porcine Circovirus 3 (PCV-3)

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-3周

其他： 

产品介绍

产品及特点

猪圆环病毒（porcine circovirus，PCV）在分类学上属圆环病毒科圆环病 毒属，为已知的最小的动物病毒之一，基因组大小约为 1.76kb。PCV 对外界 理化因子的抵抗力相当强。PCV3 于 2016 年首次在美国报道，与母猪丘疹性 皮炎、肾病综合征和流产相关。目前常用的检测鉴定猪圆环病毒3型的 PCR 法 敏感、快速，但由于需要昂贵的仪器设备、繁琐的电泳过程，而使其难以在基层 单位普及和推广，因此建立新的简便易推广的猪圆环病毒3型检测方法具有重大 的意义。为此本公司开发了简单快捷的猪圆环病毒3型 LAMP 检测试剂盒，它 具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供样品 DNA。

2. 用 LAMP 恒温扩增法扩增猪圆环病毒3型特异片段，不需要荧光 PCR 等贵 重仪器。同时扩增时间只需要 1h，适合现场或实验条件简陋的单位使用。

3. 检测灵敏性比 PCR 高 10 倍以上。

4. 特异性高，由于使用四条针对猪圆环病毒3型保守基因的特异引物，比使用 2 条引物的 PCR 专一性更高。

5. 提供无传染性的阳性对照，便于分析实验结果。

6. 每个反应的线性范围：10E2-10E7 拷贝/μL，最低：10 拷贝/μL。 7. 本试剂盒足够做 50 次 20μL 体系的 LAMP 扩增。本产品只能用于科研。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。猪圆环病毒3型 LAMP 阳性对照最 好单独放置，不要污染其他试剂。

自备试剂 待测样品。

使用方法 一、样品 DNA 的制备 1. 用自选方法纯化样品 DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂 盒兼容。本试剂盒免费赠送 20 次核酸释放剂试用装

2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个样品制备，包括一个样品制备阳性对 照（PC）和一个样品制备阴性对照（NC）。样品使用量根据所选择的试剂 盒决定。猪圆环病毒3型 LAMP 阳性对照的 100 倍稀释液作为 LAMP 阳 性对照，样品制备阴性对照是直接用 X mL 水作为阴性对照，然后和 N 个 样品一起进行 DNA 提取操作，得到 N+2 个 DNA 样品。

二、LAMP（20μL 体系）

3. 反应设置：如果有 N+2 个 DNA 纯化样品，则最好设置 N+4 个 LAMP 扩 增，增加 LAMP 阴性对照和阴性对照各 1 个。在 N+4 个 PCR 管中加入下 列成分：

成分 N+2 个 样品管 LAMP 阴性对照管 LAMP 阳性对照管

2×可视化 UNG-LAMP MagicMix 各 10 μL 10 μL 10 μL

猪圆环病毒3型 LAMP 引 物混合液 各 4 μL 4 μL 4 μL

N+2 个样品 DNA 各 6 μL - -

LAMP 阴性对照（水） 6 μL

LAMP 阳性对照（猪圆环 病毒3型 LAMP 阳性对照 的100 倍稀释液） - - 6 μL

4. 混匀，此时反应液呈现非常浅的蓝色，由于是否有反应是跟阴性对照和反 应前对比，所以一定要设置阴性对照，并且反应前要手机照相留存以供反 应后比对。

5. 置于 25℃5min（让 UNG 灭活可能的 LAMP 的污染），然后放 63℃扩增 60min。如果是在 PCR 仪中保温，必须加热盖。如果用金属浴保温，没 有热盖，必须在孔中加水以填充孔和管子间的空隙，并且在管中加 50μL 石蜡油，否则保温期间反应体系的水分会蒸发，影响反应效率。

6. 80℃10min 灭活 Bst DNA 聚合酶和 UNG 酶。

7. 将反应管放置在白色背景前观察，观察反应液颜色并用手机照相留底。

8. 实验结果分析。阳性对照将呈现蓝色，无模板的阴性对照将呈现无色或非 常浅的蓝色，样品管的颜色如果接近阳性对照则说明有扩增，如果接近阴 性对照则说明无扩增。标准的反应结果如下图（9 号为阴性，10 号为阳 性，此处的 9 号和 10 号跟下步的电泳照片中的 9 号和 10 号是相同 的两个样品）：

9. 如果需要也可以电泳确认实验结果：取 10μL LAMP 扩增产物直接进行 2%琼脂糖凝胶电泳（本产品不需要单独加 loading buffer），最好使用 100 bpDNA Marker。如果样品为阳性，将会得到梯形扩增产物。典型的 电泳结果见下图（奇数样为阴性结果，偶数样为阳性结果。此处的 9 号和 10 号跟上步照片中的 9 号和 10 号是相同的两个样品）。

10. 注意消除环境污染，LAMP 产物易产生气溶胶，飘在空气中影响下一次实 验，建议反应结束后，用紫外灭菌。先加好除阳性对照和样品以外的其它 溶液，到另一个房间添加阳性对照及样品，可有效防止引物、MagicMix 被污染。