细小病毒B19 PCR试剂盒

细小病毒B19 PCR试剂盒

英文名称：Parvovirus B19(PVB19)

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-3周

其他：

产品介绍：

产品及特点

细小病毒 B19(Parvovirus B19，B19V)引起的典型疾病是传染性红斑和 急性关节病，在妊娠妇女可引起胎儿水肿乃至死胎。荧光定量 PCR 是检测传染 性疾病的主流技术，本产品就是以染料法荧光定量 PCR 技术为基础开发的专门 检测人细小病毒 B19 的试剂盒。本试剂盒具有下列特点它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供病毒 DNA 模板。

2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增细小病毒 B19，不跟其他病毒发生 交叉反应。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。

5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。CMV PCR 阳性对照需要单独放置， 不要污染其他试剂。

自备试剂 样品 DNA。 

使用方法 一、样品 DNA 的制备 1. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试 剂盒兼容。也可以选购本公司的一管式病毒 DNAout 或其升级版柱式病毒 DNAout。本试剂盒免费赠送 15 次 DNA 病毒裂解液（一管式病毒 DNAout）

2. 如果要制备 N 个样品，则需要做 N+2 个样品制备，包括一个样品制备阳 性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在 200μL 水中加 10μL 细小病毒 B19 PCR 阳性对照的 10000 倍稀释液作为阳性对照，样 品制备阴性对照是直接用 200μL 水。提取结束后最后得到 200μL 模板 DNA（每个样品）放冰上待用，溶解 DNA 沉淀的溶液不能少于 200μL， 否则 PCR 抑制物很可能会抑制 PCR。

二、设置 PCR 反应（40 μL 体系）

3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阴性对照（用水）和一个 PCR 阳性对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入 下列成分：

成分 N+2 个 样品管 PCR 阴性 对照管 PCR 阳性 对照管

PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL

细小病毒 B19 PCR 引物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL

N+2 个样品 DNA 模板 各 18 μL - -

PCR 阴性对照（水） - 18 μL -

PCR 阳性对照（细小病毒 B19 PCR 阳性对照的 10000 倍稀释液） - - 18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程 温度 时间

预变性 93℃ 5 min

PCR 反应 （35 个循环） 93℃ 30 sec 56℃ 30 sec 72℃ 30 sec

最后延伸 72℃ 10 min

三、电泳检测

5. 取 10-20 μL PCR 产物。1.5%琼脂糖电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。 预期的 PCR 产物长度为 400bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照 必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。