梅迪-维斯纳病病毒PCR试剂盒

梅迪-维斯纳病病毒PCR试剂盒

英文名称：Maedi-Visna Virus(MVV)

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产品介绍：

产品及特点

梅迪-维斯纳病病毒( Maedi-Visna Virus)是一种 DNA 病毒，会引起梅迪维斯纳病，是一种慢性病毒性传染病。其主要特征是成年山羊呈缓慢发展的关 节炎，间或伴有间质性肺炎和间质性乳房炎；2-6 月龄羔羊表现为上行性麻痹 的神经症状，对养羊业造成严重损害，因此梅迪-维斯纳病病毒的快速准确鉴定 对该病的预防和检疫有着重要作用。本产品基于 PCR 原理开发，具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供病毒 DNA 模板。

2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增梅迪-维斯纳病病毒，与其他病毒没 有交叉反应。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。

5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次。

6. 本产品参考国家出入境检验检疫行业标准 SN/T1171-2011 开发，只能用 于科研。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。梅迪-维斯纳病病毒 PCR 阳性对照需 要单独放置，不要污染其他试剂。

自备试剂 样品 DNA。

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 15 次核酸释放剂试用装

2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和 一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在 200μL 水中加 10μL 梅 迪-维斯纳病病毒 PCR 阳性对照的 10000 倍稀释液而得，样品制备阴性对 照是直接用 200μL 水。提取结束后最后得到的模板 DNA 放冰上待用。

二、设置 PCR 反应（40μL 体系）

3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分 N+2 个 样品管 PCR 阴性 对照 PCR 阳性 对照

PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL

梅迪-维斯纳病病毒 PCR 引物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL

N+2 个样品 DNA 模板 各 18 μL - -

PCR 阴性对照（水） - 18 μL -

PCR 阳性对照（梅迪-维 斯纳病病毒 PCR 阳性对 照的 10000 倍稀释液） - - 18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程 温度 时间

预变性 95℃ 5 min

PCR 反应 （35 个循环） 95℃ 15 sec 55℃ 15 sec 72℃ 10 sec

最后延伸 72℃ 10 min

三、电泳检测

5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 290bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩 增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。