伊氏李斯特菌LAMP试剂盒

伊氏李斯特菌LAMP试剂盒

英文名称：Listeria ivanovii

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-3周

其他： 

产品介绍

产品及特点

伊氏李斯特菌(Listeria ivanovii)是引起人兽共患伊氏李斯特菌病的病原菌，该菌感染宿主中枢神经系统是导致高死亡率的主要原因，较容易感染的动物是绵羊，所以该菌又被称为绵羊伊氏李斯特菌，感染该病菌会给养殖业带来较大的经济损失，因此伊氏李斯特菌的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用。为此本公司开发了简单快捷的伊氏李斯特菌LAMP检测试剂盒，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供病毒样品。

2. 用LAMP恒温扩增法扩增伊氏李斯特菌特异片段，不需要荧光PCR等贵重仪器。同时扩增时间只需要1小时，尤其适合现场或实验条件简陋的单位使用。

3. 检测灵敏性比PCR高10倍以上。

4. 特异性高，由于使用四条针对伊氏李斯特菌保守基因的特异引物，比使用2条引物的PCR专一性更高。

5. 提供无传染性的阳性对照，便于分析实验结果。

6. 本试剂盒足够做50次20μL体系的LAMP扩增。本产品只能用于科研。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。伊氏李斯特菌LAMP阳性对照最好单独放置，不要污染其他试剂。

自备试剂 待测样品。

使用方法 一、样品DNA的制备

1. 用自选方法纯化病毒样品DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容，包括本公司的一管式病毒DNAout或其升级版柱式病毒DNAout。本试剂盒免费赠送20次核酸释放剂试用装

2. 如果有N个样品，则需要做N+2个样品制备，包括一个样品制备阳性对照（PC）和一个样品制备阴性对照（NC）。样品使用量根据所选择的试剂盒决定。如果样品使用量为XmL，则在XmL水中加10μL伊氏李斯特菌LAMP阳性对照的1万倍稀释液作为样品制备阳性对照，样品制备阴性对照是直接用X mL水作为阴性对照，然后和N个样品一起进行病毒DNA提取操作，得到N+2个DNA样品。

二、LAMP（20μL体系）

3. 反应设置：如果有N+2个DNA纯化样品，则最好设置N+4个LAMP扩增，增加LAMP阴性对照和阴性对照各1个。在N+4个PCR管中加入下列成分：

成分 N+2个

样品管 LAMP

阴性对照 LAMP

阳性对照

LAMP MagicMix 各10 μL 10 μL 10 μL

伊氏李斯特菌

LAMP引物混合液 各4 μL 4 μL 4 μL

N+2个样品DNA 各6 μL - -

自备超纯水 6 μL

伊氏李斯特菌阳性对照的1万倍稀释液 - - 6 μL

4. 置于65℃保温60分钟。如果是在PCR仪中保温，必须加热盖。如果用金属浴保温，没有热盖，建议覆盖30μL石蜡油，否则保温期间反应体系的水分会蒸发，影响反应效率。

5. 电泳确认实验结果：取10μL LAMP扩增产物直接进行2%琼脂糖凝胶电泳。LAMP阳性对照必须有正常LAMP条带（200bp的梯形扩增产物），LAMP阴性结果必须无条带，否则实验结果无效。如果LAMP阳性对照和阴性对照结果正常，再分析待测样品。

6. 典型的电泳结果见下表（奇数样为阴性结果，偶数样为阳性结果。此处的9号和10号跟上步照片中的9号和10号是相同的两个样品）：