传染性胰脏坏死病病毒RT-PCR试剂盒

传染性胰脏坏死病病毒RT-PCR试剂盒

英文名称：Infectious Pancreatic Necrosis Virus(IPNV)

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-3周

其他： 

产品介绍：

产品及特点

传染性脾肾坏死病病毒(Infectious Spleen and Kidney Necrosis Virus， ISKNV）会引起传染性脾肾坏死病，是以脾、肾坏死为主要病理特征的一种病毒 性疾病。病鱼嘴张大，呼吸加快，食欲下降，鱼体变黑，有时有抽筋样颤动；头 部充血，口四周和眼出血；脾脏肿大、糜烂和充血，呈紫黑色；肾脏肿大、充血 和溃烂；肝脏肿大，有缺血状、土黄色或有淤血点等症状；常见有腹水，肠内有 时充满黄色粘稠物，胆囊肿大；鳃贫血，发白，伴有寄生虫或细菌感染出现出血、 腐烂等现象。传染性脾肾坏死病主要流行于我国南方淡水养殖的鳜中，具有很高 的死亡率，对鳜养殖业造成很大的威胁，严重危害我国鳜养殖业发展，因此传染 性脾肾坏死病病毒的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用，为此本公 司开发了简单快捷的传染性脾肾坏死病病毒染料法荧光定量 PCR 检测试剂盒， 它具有下列特点：

1. 一站式，用于不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。

2. 根据传染性脾肾坏死病病毒的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。

3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。

4. 使用一管式 RT-PCR 技术，RT 和 PCR 两步在一个试管内完成，不需要中间 转移样品，降低了操作误差和可能的污染。

5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR。

6. 本产品只能用于科研，不能用于临床。 

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分 分开放置，因为其容易污染其他成分，造成假阳性。

自备试剂 样品 RNA

使用方法 一、样品 RNA 的制备

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性 对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 传染性脾肾坏死病病 毒 PCR 阳性对照的 100 倍稀释的（稀释后浓度为 1×10E6 拷贝/μL，10μL 相当于 1 万拷贝，可以将 10μL 原液加入到 990μL 自备 TE 溶液中，充分混 匀，此为 100 倍稀释液。）再加上一定量的水作为制备的阳性对照（加水后其 总体积跟样品一样，样品体积多少取决于所用试剂盒的要求）。可以用水作为 制备的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。

2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提 取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 20 次核酸释放剂试用装

二、设置 RT-PCR 反应（20μL 体系）

3. 如果有 N+2 个样品，则标记 N+4 个 PCR 管（额外增加的两个管一个是 RT-PCR 阳性对照，另一个是 RT-PCR 阴性对照）并按照下表在 PCR 管中 加入下列成分： 

成份 N+2 个 样品管 RT-PCR 阴 性对照管 RT-PCR 阳 性对照管

5×双酶一管式 RT-PCR Buffer 各 4 μL 4 μL 4 μL

传染性脾肾坏死病病毒 RT-PCR 引 物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL

N+2 个制备的 RNA 样品 各 12.5 μL - -

超纯水 - 12.5 μL -

传染性脾肾坏死病病毒 RT-PCR 阳 性对照 的 100 倍稀释液 - - 12.5 μL

MMLV-Taq Mix 1.5 μL 1.5 μL 1.5 μL

4. 上机进行 RT-PCR，RT-PCR 反应参数为:

过程 温度 时间

逆转录 42℃ 30 min

预变性 95℃ 5 min

PCR 反应 （35 个循环） 98℃ 10 sec 65℃ 35 sec

延伸 72℃ 1min

5. 琼脂糖电泳检测扩增效果，如果阴性对照有此扩增产物或阳性对照无此扩增 产物，则说明实验失败，需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有此 扩增产物、阳性对照有此扩增产物的情况下，才有必要分析样品的实验结果， 如果有此扩增产物则为阳性，如果无则为阴性。