人类嗜T淋巴细胞病毒1型RT-PCR试剂盒

人类嗜T淋巴细胞病毒1型RT-PCR试剂盒

英文名称：Human T-cell Lymphoma Virus 1(HTLV-1)

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-3周

其他： 

产品介绍：

产品及特点

人类嗜 T 淋巴细胞病毒 1 型（Human T-lymphotropic Virus 1,HTLV-1） 是一种感染后可导致血癌或其他转移癌的 RNA 病毒，在体内主要感染 CD4+ T 淋巴细胞，可引起成人 T 淋巴细胞白血病/淋巴瘤、HTLV-Ⅰ相关脊髓病（HTLV- Ⅰassociated myelopathy，HAM/热带痉挛性下肢瘫，tropical spastic paraparesis TSP）及色素层炎（uveitis），主要通过输血、针头、性行为、母 子传染。HTLV-I 病毒是爱滋病毒 (HTLV-I) 的远亲，但 HTLV-I 和爱滋病的 发生没有任何关连。目前各捐血中心以酵素免疫法全面筛检 HTLV-I 病毒。本产 品就是针对此需求而建立的一种检测 HTLV-１病毒 RNA 的 RT-PCR 检测方法， 本试剂盒具有下列特点：

1. 即开即用，用户不需要单独准备各种成分。

2. 根据 HTLV-1 保守序列设计，专一性强。

3. 使用两步式 RT-PCR，先做 RT 再做 PCR，操作更加灵活。

4. 提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照，便于分析实验结果。

5. 本试剂盒足够 50 次 20 μL 体系的 RT 反应和 50 次 40 μL 体系的常规 PCR 反应。

6. 本产品只用于科研，不能用于临床诊断。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限一年。阳性对照最好跟其他试剂分开放置，以 避免污染，

自备试剂 一管式病毒 RNAout 或柱式病毒 RNAout

使用方法 一、样品 RNA 的制备

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳 性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 HTLV-1 RT-PCR 阳性 对照的 10000 倍稀释的（稀释后浓度为 1×10E4 拷贝/μL，10μL 相当于 1 万拷贝，可以将 10uL 原液加入到 990uL 自备 TE 溶液中，充分混匀， 此为 100 倍稀释液。再取 10uL 此稀释液加入到 990uL 自备 TE 溶液中， 充分混匀，此为 10000 倍稀释液，直接作为第三步的 PCR 阳性对照）再 加上一定量的水作为制备的阳性对照（加水后其总体积跟样品一样，样品体 积多少取决于所用试剂盒的要求）。可以用水作为制备的阴性对照。制备所 得成为样品 RNA。

2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 15 次 RNA 病毒裂解液试用装（一管 式 病 毒 RNAout 的 成 分 ），

二、RT（逆转录）反应合成 cDNA

3. 对 N+2 个提取的 RNA 样品，最好设置 N+3 个反应，多出的一个作为 RT 阴性对照。按照下表设置 RT 反应体系（20μL 体系）：

成份 N+2 个样品管 RT 阴性对照管 样品 RNA（来于样品制备） 各 1-10 μL 1-10 μL

HTLV-1 RT-PCR 引物混合液 各 2 μL 2 μL

超纯水 补水到 14 μL 补水到 14 μL

RT Buffer(含 dNTP) 各 5 μL 5 μL

MMLV（含 RI） 各 1 μL 1 μL

总体积 20 μL 20 μL

4. 42℃保温 60 min，70℃保温 10 min 以终止反应，然后放置在冰上待用。 此为合成的 cDNA 样品。

三、PCR 反应（40 μL 体系，在样品制备室进行）

5. 对 N+3 个 cDNA 样品，最好设置 N+5 个 PCR 反应，多出的一个是 PCR 阳性对照，一个是 PCR 阴性对照，便于在出问题时分析原因。在 N+5 个 PCR 管中按下表分别加入下列成分：

成分 N+3 个样品管 PCR 阴性 对照 PCR 阳性 对照

PCR MagicMix 3.0 20 μL 20 μL 20 μL

HTLV-1 RT-PCR 引物混合物 1 μL 1 μL 1 μL

N+3 个 cDNA 样品 各 1-5 μL 不加 不加

PCR 阳性对照（试剂盒提供的 原液的 10000 倍稀释液） 不加 不加 1 μL

补水到 40 μL 40 μL 40 μL

6. 上机进行 PCR，PCR 反应参数为:

过程 温度 时间

预变性 94℃ 3 分钟

PCR 反应 （35 个循环） 94℃ 15 s 53℃ 30 s 72℃ 30 s

延伸 72℃ 10 分钟

7. 电泳检测PCR产物。PCR结束后不加上样液直接上样进行琼脂糖凝胶电泳。 阳性样品预期的 PCR 产物长度为 119 bp。