传染性法氏囊病病毒RT-PCR试剂盒

传染性法氏囊病病毒RT-PCR试剂盒

英文名称：Infectious Bursa Disease Virus(IBDV)

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-3周

其他： 

产品介绍：

产品及特点

传染性法氏囊病病毒(Infectious Bursa Disease Virus,IBDV)是一种 RNA 病毒，会引起鸡传染性法氏囊病，是传染性法氏囊病毒引起的一种急性、高度传 染性疾病。由于该病发病突然、病程短、死亡率高，且可引起鸡体免疫抑制，目 前仍然是养鸡业的主要传染病之一，该病的发生会给养殖业造成较大的经济损 失，因此传染性法氏囊病病毒的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作 用。本产品基于 PCR 原理开发,它具有下列特点：

1. 一站式，用于不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。

2. 根据传染性法氏囊病病毒的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。

3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。

4. 使用一管式 RT-PCR 技术，RT 和 PCR 两步在一个试管内完成，不需要中间 转移样品，降低了操作误差和可能的污染。

5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR。

6. 本产品只能用于科研，不能用于临床。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分 分开放置，因为其容易污染其他成分，造成假阳性。

自备试剂 样品 RNA 使用方法

一、样品 RNA 的制备

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性 对照），一个是 NC（样品制备阴 当于 1 万拷贝，可以将 10μL 原液加入到 990μL 自备 TE 溶液中，充分混匀， 此为 100 倍稀释液。）再加上一定量的水作为制备的阳性对照（加水后其总体 积跟样品一样，样品体积多少取决于所用试剂盒的要求）。可以用水作为制备 的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。

2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提 取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 20 次核酸释放剂试用装

二、设置 RT-PCR 反应（20μL 体系）

3. 如果有 N+2 个样品，则标记 N+4 个 PCR 管（额外增加的两个管一个是 RT-PCR 阳性对照，另一个是 RT-PCR 阴性对照）并按照下表在 PCR 管中 加入下列成分：

成份 N+2 个 样品管 RT-PCR 阴 性对照管 RT-PCR 阳 性对照管

5×双酶一管式 RT-PCR Buffer 各 4 μL 4 μL 4 μL 传

染性法氏囊病病毒 RT-PCR 引物 混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL

N+2 个制备的 RNA 样品 各 12.5 μL - -

超纯水 - 12.5 μL -

传染性法氏囊病病毒 RT-PCR 阳性 对照 的 100 倍稀释液 - - 12.5 μL

MMLV-Taq Mix 1.5 μL 1.5 μL 1.5 μL

4. 上机进行 RT-PCR，RT-PCR 反应参数为:

过程 温度 时间

逆转录 42℃ 30 min

预变性 95℃ 5 min

PCR 反应 （35 个循环） 95℃ 45 sec 55℃ 45 sec 72℃ 45 sec

延伸 72℃ 10 min

5. 琼脂糖电泳检测扩增效果，阳性样品预期得到的扩增产物长度为 453bp。如 果阴性对照有此扩增产物或阳性对照无此扩增产物，则说明实验失败，需要 分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有此扩增产物、阳性对照有此扩增 产物的情况下，才有必要分析样品的实验结果，如果有此扩增产物则为阳性， 如果无则为阴性。