人类嗜T淋巴细胞病毒1型前病毒探针法荧光定量PCR试剂盒

人类嗜T淋巴细胞病毒1型前病毒探针法荧光定量PCR试剂盒

英文名称：Human T-cell Lymphoma Virus Provirus(HTLV-1)

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-3周

其他： 

产品介绍：

产品及特点

人类嗜 T 淋巴细胞病毒 1 型（Human T-lymphotropic Virus 1，HTLV1）是一种感染后可导致血癌或其他转移癌的 RNA 病毒，在体内主要感染 CD4+ T 淋巴细胞，可引起成人 T 淋巴细胞白血病/淋巴瘤、HTLV-Ⅰ相关脊髓病 （HTLV-Ⅰassociated myelopathy），HAM/热带痉挛性下肢瘫（tropical spastic paraparesis TSP）及色素层炎（uveitis），主要通过输血、针头、性行 为、母子传染。患者的白血病细胞内有 HTLV 前病毒 DNA 的整合，所以 HTLV１前病毒 DNA 水平可以作为病毒载量之外的另一标志物。本产品就是针对此需 求而建立的一种检测 HTLV-１前病毒 DNA 的探针法荧光定量 PCR 检测方法， 它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板。

2. 引物和探针经过优化，灵敏性高，可以达到 100 拷贝/反应。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. 特异性高，引物是根据 HTLV-1 高度保守区设计，不会跟其他病毒的 DNA 发生交叉反应。

5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 PCR 反应。

6. 本产品只能用于科研。 

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。

自备试剂 样品 DNA。

使用方法 一、稀释标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。 由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能 污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本 产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照。

1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。

2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液，最好用带芯枪头， 下同）。

3. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震 荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所 得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所 得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。 二、样品 DNA 的制备

7. 如果有 N 个样品，最好设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性 对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 阳性对照的 10000 倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为 PC。另外用水作为 NC。

8. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数基因组 DNA 提取试 剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 20 次免 DNA 提取的核酸释放剂试用 装，该释放剂的裂解液可以直接作为 PCR 模板

三、Probe qPCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）

9. 如果只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照，6 个用于标准曲线样品。

10. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设 置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好 后最后加）：

成分 样品管 N+2 个 PCR 阴性 对照管 标准曲线 样品管（2-7 管）

2×Probe qPCR MagicMix 10 μL 10 μL 各 10 μL

人类嗜 T 淋巴细胞病毒 1 型前病毒 qPCR 探针 1 μL 1 μL 各 1 μL

人类嗜 T 淋巴细胞病毒 1 型前病 毒探针法qPCR 引物混合液 2 μL 2 μL 各 2 μL

N+2 个待测样品 DNA 模板 6 μL - -

自备超纯水 - 6 μL -

第 7 步所得标准曲线样品稀释液 （2-7 号） - - 各 6μL（2 号样 到 2 号管，3 号 样到 3 号管…）

11. 盖上盖子后上机，按下面参数进行 PCR：

过程 温度 时间

预变性 95℃ 5 min

PCR 反应 （45 个循环） 95℃ 15 sec 60℃ 1 min（采集 FAM 通道的荧光信号）

五、数据处理

12. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值 为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 DNA 浓度的 log 值，再推算出其浓度。

13. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照 Ct 必须大 于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该 小于或等于 30。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性，如果小 于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间，则重复一次。重复实验的 Ct 值如果大于或等于 40 则为阴性，如果小于 40，则为阳性。