传染性皮下和造血器官坏死病病毒PCR试剂盒

传染性皮下和造血器官坏死病病毒PCR试剂盒

英文名称：Infectious Hypodermal and Hematopoietic Necrosis Virus(IHHNV)

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-3周

其他：

产品介绍：

产品及特点

传 染 性 皮 下 和 造 血 器 官 坏 死 病 病 毒 （ Infectious Hypodermal and Hematopoietic Necrosis Virus，IHHNV）可感染世界各地的养殖对虾，引起 急性传染性皮下和造血组织坏死病，在太平洋地区、东南亚、中东存在该病的流 行，我国也有较高的发病率。大部分对虾品种都可被感染，其中细角滨对虾死亡 率可达 90%以上，因此灵敏快捷的诊断产品具有重要的意义。本产品基于 PCR 原理，按国家标准 GB/T25878-2010 开发。它具有下列特点：

1. 一站式，用于不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。

2. 根据传染性皮下和造血器官坏死病病毒的保守基因序列设计的引物，具有良 好的特异性。

3. 灵敏度可以达到 500 拷贝/反应。

4. 本产品足够 50 次 40μL 体系的常规 PCR。

5. 本产品只能用于科研。

6. 参考国标 GB/T25878-2010 研发。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分 分开放置，因为其容易污染其他成分，造成假阳性。

自备试剂 样品 DNA 使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性 对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 传染性皮下和造血器 官坏死病病毒 PCR 阳性对照的 10000 倍稀释的（稀 溶液中，充分混匀，此为 100 倍稀释液。再取 10μL 此稀释液加入到 990μL 自备 TE 溶液中，充分混匀，此为 10000 倍稀释液）再加上一定量的水作为 制备的阳性对照（加水后其总体积跟样品一样，样品体积多少取决于所用试 剂盒的要求）。可以用水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品 DNA。

2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提 取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 20 次不需 DNA 纯化步骤的核酸释 放剂试用装

二、设置 PCR 反应（20μL 体系）

3. 如果有 N+2 个样品，则标记 N+4 个 PCR 管（额外增加的两个管一个是 PCR 阳性对照，另一个是 PCR 阴性对照）并按照下表在 PCR 管中加入下列成分：

成份 N+2 个样品管 PCR 阴性 对照

PCR 阳性 对照 PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL

传染性皮下和造血器官坏死病病 毒 PCR 引物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL

N+2 个制备的 DNA 模板 各 18 μL 不加 不加

超纯水 不加 18 μL 不加

传染性皮下和造血器官坏死病病 PCR 阳性对照的 10000 倍稀释液 不加 不加 18 μL

4. 上机进行 PCR，PCR 反应参数为:

过程 温度 时间

预变性 95℃ 5 分钟

PCR 反应 （35 个循环） 93℃ 30 秒 55℃ 30 秒 72℃ 60 秒

延伸 72℃ 7 分钟

5. 琼脂糖电泳检测扩增效果，阳性样品预期得到的扩增产物长度为 389bp。如 果阴性对照有此扩增产物或阳性对照无此扩增产物，则说明实验失败，需要 分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有此扩增产物、阳性对照有此扩增 产物的情况下，才有必要分析样品的实验结果，如果有此扩增产物则为阳性， 如果无则为阴性。 关联产品 传染性皮下和造血器官坏死病病毒可视