前病毒PCR试剂盒

前病毒PCR试剂盒

英文名称：HIV-2 Provirus HIV-2

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-3周

其他：

产品介绍：

产品及特点

人类免疫缺陷病毒 2 型（HIV-2）主要流行于西非，其患者血浆中病毒 RNA 水平一直以来是评判抗病毒治疗效果或预测疾病进展的重要指标。但是，经抗 病毒治疗后血浆 HIV-2 RNA 已达到基线水平感染者的血液、精液或淋巴结中 仍可以检测到 HIV-2 前病毒 DNA 的存在，构成病毒储藏库，对清除 HIV-2 病毒构成严重阻碍。所以在病毒载量已经检测不到的情况下，HIV-2 前病毒 DNA 水平可以作为除Ｔ细胞计数和病毒载量之外的另一标志物。因此检测 HIV-2 前病毒 DNA 具有重要意义。本产品具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供病毒 DNA 模板。

2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增人疱疹病毒 8 型，与其他病毒没有交叉反应。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。

5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。人疱疹病毒 8 型 PCR 阳性对照需要 单独放置，不要污染其他试剂。

自备试剂 样品 DNA。 

使用方法 一、样品 DNA 的制备 1. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试 剂盒兼容。也可以选购本公司的一管式病毒 DNAout 或其升级版柱式病毒 DNAout。

2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和 一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照用适量的水加 10μL 人疱疹病 毒 8 型 PCR 阳性对照的 10000 倍稀释液而得，其总体积等于试剂盒所需 的样品量，样品制备阴性对照是直接用水。

二、设置 PCR 反应（40 μL 体系）

3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分 N+2 个 样品管 PCR 阴性 对照 PCR 阳性 对照 

PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL

人疱疹病毒 8 型 PCR 引

物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL

N+2 个样品 DNA 模板 各 18 μL - -

PCR 阴性对照（水） - 18 μL -

PCR 阳性对照（人疱疹病

毒 8 型 PCR 阳性对照的

10000 倍稀释液）- - 18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应

过程 温度 时间 

预变性 95℃ 5 min PCR 反应 （35 个循环） 95℃ 30 sec 55℃ 30 sec 72℃ 60 sec 最后延伸 72℃ 10 min

三、电泳检

5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 231bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩 增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。