流行性造血器官坏死病毒染料法荧光定量PCR试剂盒

流行性造血器官坏死病毒染料法荧光定量PCR试剂盒

英文名称：Epizootic Hematopoietic Necrosis Virus(EHNV)

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-3周

其他： 

产品介绍

产品及特点

流行性造血器官坏死病毒(Epizootic Hematopoietic Necrosis Virus，EHNV) 会造成流行性造血器官坏死病，是一种鱼类全身性传染病，自然宿主仅见于赤鲈和虹鳟，赤鲈和虹鳟各个年龄段的鱼均易感，但鱼苗和稚鱼的症状较成鱼明显。无特征性临床症状，仅见鱼大量死亡。濒死鱼运动失衡，鳃盖张开，头部四周充血；有的病鱼体色发暗，皮肤、鳍条和鳃损伤坏死，对养殖业造成较大损失，因此流行性造血器官坏死病毒的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用，为此本公司开发了简单快捷的流行性造血器官坏死病毒染料法荧光定量 PCR 检测试剂盒，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供病毒样品。

2. 根据肠道腺病毒 41 型保守序列设计的专一性引物，与相关病毒无交叉反应。

3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。

4. 一管式荧光定量 PCR 检测，避免后续污染。

5. 本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。

6. 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。 

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。溶组织内阿米巴LAMP阳性对照最好单独放置，不要污染其他试剂。

自备试剂 待测样品。

使用方法 一、样品DNA的制备

1.用自选方法纯化病毒样品DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容，包括本公司的一管式病毒DNAout或其升级版柱式病毒DNAout。

2.如果有N个样品，则需要做N+2个样品制备，包括一个样品制备阳性对照（PC）和一个样品制备阴性对照（NC）。样品使用量根据所选择的试剂盒决定。如果样品使用量为XmL，则在XmL水中加10μL溶组织内阿米巴LAMP阳性对照的1万倍稀释液作为样品制备阳性对照，样品制备阴性对照是直接用X mL水作为阴性对照，然后和N个样品一起进行病毒DNA提取操作，得到N+2个DNA样品。

二、LAMP（20μL体系）

3.反应设置：如果有N+2个DNA纯化样品，则最好设置N+4个LAMP扩增，增加LAMP阴性对照和阴性对照各1个。在N+4个PCR管中加入下列成分：

成分 N+2个

样品管 LAMP

阴性对照 LAMP

阳性对照

LAMP MagicMix 各10 μL 10 μL 10 μL

溶组织内阿米巴

LAMP引物混合液 各4 μL 4 μL 4 μL

N+2个样品DNA 各6 μL - -

自备超纯水 6 μL

溶组织内阿米巴阳性对照的1万倍稀释液 - - 6 μL

4.置于65℃保温60分钟。如果是在PCR仪中保温，必须加热盖。如果用金属浴保温，没有热盖，建议覆盖30μL石蜡油，否则保温期间反应体系的水分会蒸发，影响反应效率。

5.电泳确认实验结果：取10μL LAMP扩增产物直接进行2%琼脂糖凝胶电泳。LAMP阳性对照必须有正常LAMP条带（200bp的梯形扩增产物），LAMP阴性结果必须无条带，否则实验结果无效。如果LAMP阳性对照和阴性对照结果正常，再分析待测样品。

6.典型的电泳结果见下表（奇数样为阴性结果，偶数样为阳性结果。此处的9号和10号跟上步照片中的9号和10号是相同的两个样品）：