溶组织内阿米巴染料法荧光定量PCR试剂盒

溶组织内阿米巴染料法荧光定量PCR试剂盒

英文名称：Entamoeba histolytica

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-3周

其他： 

产品介绍

产品及特点

阿米巴原虫由于生活环境不同可分为内阿米巴和自由阿米巴，前者寄生于人和动 物，后者生活在水和泥土中，偶尔侵入动物机体。对人类危害最大的是属于内阿米巴属 的溶组织内阿米巴（Entamoeba histolytica），它会引发阿米巴痢疾和肝脓肿，引发 的病例多，感染面广，危害大。因此对溶组织内阿米巴进行快速灵敏的诊断具有重要的 意义。本产品就是根据溶组织内阿米巴 rRNA 编码基因的保守区设计引物而开发的高灵 敏荧光定量 PCR 产品。本试剂盒具有下列特点： 

1. 根据溶组织内阿米巴 rRNA 编码基因保守序列设计的专一性引物，与其他肠道疾病病原体（如 B.hominis、E.coli、E.dispar、E.moshkovskii、V.cholerae 等）无交叉反应。

2. 灵敏度比常规 PCR 高 2-3 个数量级，可以达到几十拷贝/反应。

3. 即开即用，用户只需要提供样品模板，操作简单，定量准确快速。

4. 一管式荧光定量 PCR 检测，避免后续污染。

5. 本试剂盒足够 100 次 20uL 反应体系的荧光定量 PCR。

6. 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。溶组织内阿米巴LAMP阳性对照最好单独放置，不要污染其他试剂。

自备试剂 待测样品。

使用方法 一、样品DNA的制备

1.用自选方法纯化病毒样品DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容，包括本公司的一管式病毒DNAout或其升级版柱式病毒DNAout。

2.如果有N个样品，则需要做N+2个样品制备，包括一个样品制备阳性对照（PC）和一个样品制备阴性对照（NC）。样品使用量根据所选择的试剂盒决定。如果样品使用量为XmL，则在XmL水中加10μL溶组织内阿米巴LAMP阳性对照的1万倍稀释液作为样品制备阳性对照，样品制备阴性对照是直接用X mL水作为阴性对照，然后和N个样品一起进行病毒DNA提取操作，得到N+2个DNA样品。

二、LAMP（20μL体系）

3.反应设置：如果有N+2个DNA纯化样品，则最好设置N+4个LAMP扩增，增加LAMP阴性对照和阴性对照各1个。在N+4个PCR管中加入下列成分：

成分 N+2个

样品管 LAMP

阴性对照 LAMP

阳性对照

LAMP MagicMix 各10 μL 10 μL 10 μL

溶组织内阿米巴

LAMP引物混合液 各4 μL 4 μL 4 μL

N+2个样品DNA 各6 μL - -

自备超纯水 6 μL

溶组织内阿米巴阳性对照的1万倍稀释液 - - 6 μL

4.置于65℃保温60分钟。如果是在PCR仪中保温，必须加热盖。如果用金属浴保温，没有热盖，建议覆盖30μL石蜡油，否则保温期间反应体系的水分会蒸发，影响反应效率。

5.电泳确认实验结果：取10μL LAMP扩增产物直接进行2%琼脂糖凝胶电泳。LAMP阳性对照必须有正常LAMP条带（200bp的梯形扩增产物），LAMP阴性结果必须无条带，否则实验结果无效。如果LAMP阳性对照和阴性对照结果正常，再分析待测样品。

6.典型的电泳结果见下表（奇数样为阴性结果，偶数样为阳性结果。此处的9号和10号跟上步照片中的9号和10号是相同的两个样品）：