脑心肌炎病毒RT-PCR试剂盒

脑心肌炎病毒RT-PCR试剂盒

英文名称：Encephalomyocarditis Virus(EMCV) 

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产品介绍：

产品及特点

脑心肌炎病毒（Encephalomyocarditis Virus，EMCV）在分类上属小 RNA 病毒科，心肌病毒属，是一种无囊膜的单股正链 RNA 病毒。由 EMCV 引 起 的猪脑心肌炎是猪的一种以脑炎、心肌炎或心肌周围炎为主要特征的急性传染 病，给养猪业造成了极大的经济损失。本产品适用于检测猪血清、脑、心肌以及 淋巴结等组织标本或病毒培养液中 EMCV 的 mRNA，适用于 EMCV 感染的 辅助诊断。它具有下列特点：

1. 一站式，用于不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。

2. 根据 EMCV 的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。

3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。

4. 使用一管式 RT-PCR 技术，RT 和 PCR 两步在一个试管内完成，不需要中间 转移样品，降低了操作误差和可能的污染。

5. 本产品足够 50 次 30uL 体系的 RT-PCR。

6. 本产品只能用于科研，不能用于临床。 

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分 分开放置，因为其容易污染其他成分，造成假阳性。

自备试剂 样品 RNA

使用方法 一、样品 RNA 的制备

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性 对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 11.5μL EMCV PCR 阳性 对照的 10000 倍稀释的（稀释后浓度为 1×10E4 拷贝/μL，10μL 相当于 1 万拷贝，可以将 10uL 原液加入到 990uL 自备 TE 溶液中，充分混匀，此为 100 倍稀释液。再取 10uL 此稀释液加入到 990uL 自备 TE 溶液中，充分混 匀，此为 10000 倍稀释液）再加上一定量的水作为制备的阳性对照（加水后 其总体积跟样品一样，样品体积多少取决于所用试剂盒的要求）。可以用水作 为制备的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。

2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提 取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 15 次 RNA 病毒裂解液试用装（一管式病 毒 RNAout 的成分）

二、设置 RT-PCR 反应（30uL 体系）

3. 如果有 N+2 个样品，则标记 N+4 个 PCR 管（额外增加的两个管一个是 RT-PCR 阳性对照，另一个是 RT-PCR 阴性对照）并按照下表在 PCR 管中 加入下列成分： 成份 样品（N+2 个） RT-PCR 阳性对照 RT-PCR 阴性对照 2×双酶一管式 RT-PCR Buffer 各 15 uL 15 uL 15 uL EMCV RT-PCR 引物混合液 各 2 uL 2 uL 2 uL 样品 RNA（N+2 个） 11.5 uL 不加 不加 EMCV RT-PCR 阳性对照 10000 倍稀释液 不加 11.5 uL 不加 MMLV-Taq Mix 1.5 uL 1.5 uL 1.5 uL

4. 上机进行 RT-PCR，RT-PCR 反应参数为:

过程 温度 时间 逆转录 42℃ 30 分钟 预变性 94℃ 2 分钟 PCR 反应 （35 个循环） 94℃ 30 秒 56℃ 30 秒 72℃ 30 秒 延伸 72℃ 5 分钟

5. 琼脂糖电泳检测扩增效果，阳性样品预期得到的扩增产物长度为 286bp。如 果阴性对照有此扩增产物或阳性对照无此扩增产物，则说明实验失败，需要 分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有此扩增产物、阳性对照有此扩增 产物的情况下，才有必要分析样品的实验结果，如果有此扩增产物则为阳性， 如果无则为阴性