隐孢子虫通用PCR试剂盒

隐孢子虫通用PCR试剂盒

英文名称：Cryptosporidium spp.

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产品介绍：

产品及特点

隐孢子虫(Cryptosporidium spp.)为体积微小的球虫类寄生虫。广泛存在 多种脊椎动物体内，寄生于人和大多数哺乳动物的主要为微小隐孢子虫，由微 小隐孢子虫引起的疾病称隐孢子虫病，是一种以腹泻为主要临床表现的人畜共 患性原虫病。病程可迁延数月至 1 年。病人常并发肠外器官隐孢子虫病，如呼 吸道和胆道感染，使得病情更为严重复杂。隐孢子虫感染常为 AIDS 病人并发 腹泻而死亡的原因。因此快速准确诊断隐孢子虫具有重要意义。为此本公司基 于 PCR 原理开发了本产品，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供寄生虫 DNA 模板。

2. 根据蛇形隐孢子虫保守序列设计的专一性引物，与其他微生物无交叉反应

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。

5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次。

6. 本产品只能用于科研。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其

他试剂。 自备试剂 样品 DNA。 使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 阳性对照的 1千倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为 PC。另外用水作为 NC。

2. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数寄生虫 DNA 提取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 20 次免 DNA 提取的核酸释放剂，本产品的裂解液可以直接作为 PCR 模板，省略了 DNA 提取步骤。

放剂或产品编号 61202 下载。

二、设置 PCR 反应（40 μL 体系）

3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分

N+2 个

样品管

PCR 阴性

对照

PCR 阳性

对照

PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL

蛇形隐孢子虫 PCR 引物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL

N+2 个样品 DNA 模板 各 18 μL - - 样品制备阴性对照（超纯水） - 18 μL - 蛇形隐孢子虫 PCR 的 1 千倍稀释液 - - 18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程 温度 时间

预变性 95℃ 5 min

PCR 反应

（35 个循环）

95℃ 15 sec

55℃ 15 sec

72℃ 60 sec

最后延伸 72℃ 10 min

三、电泳检测

5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。阳性对照必须有条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。