-
专业包装 正品保证
-
快乐服务 售后无忧
-
会员特权 优惠不断
-
个人信息 严格保护
| 别名: | 生孢梭菌（生孢梭状芽孢杆菌）染料法荧光定量PCR试剂盒 | ||
|---|---|---|---|
| 储存条件: | 低温运输、-20℃保存(阳性对照最好和其他试剂分开放置)，有效期一年。 | ||
|
| 货号 | 规格 | 可用库存 | 销售价(RMB) | 您的折扣价(RMB) | 购买数量 |
|---|
| 熔点: | |
|---|---|
| 密度: | |
| 储存条件: | 低温运输、-20℃保存(阳性对照最好和其他试剂分开放置)，有效期一年。 |
生孢梭菌（生孢梭状芽孢杆菌）染料法荧光定量PCR试剂盒
英文名称：Clostridium sporogenes
运输：低温
保存：负20度
有效期：一年
货期：2-3周
其他：
产品介绍
产品及特点
生孢梭菌（Clostridium sporogenes）又名产孢梭菌，能够产生孢子，为革兰氏 染色阳性菌。此菌以周生鞭毛运动，严格厌氧，能分解蛋白质和糖类，能发酵葡萄糖和 麦芽糖，产生丁酸和少量乙酸等，多存在于土壤、伤口和肠道内。在人体内，此菌只能， 在实体肿瘤中生长，不能在其他组织中（富氧），因此具有潜在的医疗价值。本试剂盒 是基于 qPCR 技术开发的生孢梭菌快速定量试剂盒，它具有下列特点：
1. 根据生孢梭菌的保守序列设计的专一性引物，与相关细菌无交叉反应。
2. 灵敏度比常规 PCR 高 2-3 个数量级，可以达到几百拷贝/反应。
3. 即开即用，用户只需要提供样品模板，操作简单，定量准确快速。
4. 一管式荧光定量 PCR 检测，避免后续污染。
5. 本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。
6. 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
运输及保存 低温运输、-20℃保存(阳性对照最好和其他试剂分开放置)，有效期一年。
自备试剂 DNA 模板、10×ROX（根据机型决定，具体见使用方法）。
使用方法 一、稀释 PCR 阳性对照（以 10E 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
8. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照）， 一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 上步制备的阳性对照梯度稀释液 中的第 4 号（浓度为 1×10E4 copy/μL，10μL 相当于 1 万拷贝）或第 5 号（浓 度为 1×10E5 copy/μL，10μL 相当于 10 万拷贝）再加上一定量的水（总体积 跟处理样品一样，处理阳性体积多少取决于所用试剂盒的要求）作为制备的阳性对 照。可以用水作为制备的阴性对照。用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂 盒跟市场上大多数细菌 DNA 提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的一柱式细菌 DNAout。本试剂盒免费赠送不需要 DNA 提取操作的 DNA 释放剂试用装
三、设置 qPCR 反应（20 μL 体系，在样品制备室进行）
9. 如果只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个 样品，1 个用于 PCR 阴性对照，6 个用于 PCR 阳性对照）。如果做 2-3 次重复， 则反应设置数量相应增加。
10. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕 后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加）： 成分 N+2 个制备 所得样品 PCR 阴性 对照 PCR 阳性 对照（2-7 管） 2×qPCR MagicMix 10 μL 10 μL 各 10 μL 生孢梭菌 PCR 引物混合物 2 μL 2 μL 各 2 μL 自备 10×ROX (见注) 2 μL 2 μL 各 2 μL 样品制备所得 DNA 模 板（来于第 8 步） 6 μL 不加 不加 稀释所得 6 个阳性对照 （来于第 6 步） 不加 不加 各 6 μL（2 号样到 2 号管，3 号样到 3 号管…）
注:仅 ABI7500、7700 和 7900 仪器需要使用 ROX 作为对照，其他荧光 PCR 仪 器（如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene 3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480）不需要使用 ROX。
11. 盖上盖子后上机，按下面参数进行 PCR（具体 PCR 参数可以根据仪器不同而自行 优化）。 过程 温度 时间 预变性 95℃ 3 分钟 PCR 反应 （40 个循环） 95℃ 15 秒 60℃ 60 秒（数据采集） 溶解曲线分析
12. 数据采集 在 60℃保温步骤用 SYBR 通道进行荧光数据采集，PCR 结束后再进行溶解曲线分 析以排除引物二聚体，具体设计按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光 染料在不结合 DNA 时，最大吸收光谱在 471 nm，结合 DNA 时的最大吸收光谱 在 500 nm，最大发射光谱在 530 nm。
四、数据处理
13. 如果 PCR 阳性对照和 PCR 阴性对照均得到预期阳性和阴性结果，则说明 PCR 有 效，可以进行后续分析。以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制 标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 DNA 浓度的 log 值， 再推算出其浓度。
14. 如果 PCR 阳性对照或 PCR 阴性对照任何一个没有得到预期阳性和阴性结果（如 PCR 阳性对照没有扩增，或阴性对照出现扩增），则说明 PCR 实验无效或污染， 不需要进行后续分析，需要重复 PCR 或请跟厂家联系。
15. 如果样品制备阳性对照或样品制备阴性对照均得到预期阳性和阴性结果，说明样品 制备操作有效，实验结果有效。
16. 如果样品制备阳性对照或样品制备阴性对照任何一个没有得到预期结果（如样品制 备阳性对照无扩增，或样品制备阴性对照有扩增），说明样品制备操作无效或有污 染，实验结果无效，需要重复样品制备过程或请跟厂家联系。
