基孔肯尼雅病毒RT-PCR试剂盒

基孔肯尼雅病毒RT-PCR试剂盒

英文名称：Chikungunya Virus(CHIKV)

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产品介绍：

产品及特点

基孔肯尼雅病毒(Chikungunya Virus，CHIKV)是一种RNA病毒，会引起基孔肯雅病，发热病人常突然起病，寒战、发热，体温可达39℃，伴有头痛、恶心、呕吐、食欲减退，淋巴结肿大。一般发热1~7天即可退热，约3天后再次出现较轻微发热，持续3~5天恢复正常，有些患者可有结膜充血和轻度结膜炎表现，关节疼痛与发热同时，患者全身的多个关节和脊椎出现十分剧烈的疼痛，且病情发展迅速，往往在数分钟或数小时内关节功能丧失，不能活动，因此灵敏快捷的诊断产品具有重要的意义。为此本公司开发了本产品，可用于在科研领域快速定量检测基孔肯尼雅病毒。它具有下列特点。它具有下列特点： 

1.一站式，用于不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。

2.根据基孔肯尼雅病毒的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。

3.灵敏度可以达到1000拷贝/反应。

4.使用一管式 RT-PCR技术，RT和PCR两步在一个试管内完成，不需要中间转移样品，降低了操作误差和可能的污染。

5.本产品足够50次20μL体系的RT-PCR。

6.本产品只能用于科研，不能用于临床。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为12个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分分开放置，因为其容易污染其他成分，造成假阳性。

自备试剂 样品RNA

使用方法 一、样品RNA的制备

1.如果有N个样品，必须设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL 基孔肯尼雅病毒PCR阳性对照的10000倍稀释的（稀释后浓度为1×10E4拷贝/μL，10μL相当于1万拷贝，可以将10μL原液加入到990μL 自备TE溶液中，充分混匀，此为100倍稀释液。再取10μL此稀释液加入到990μL 自备TE溶液中，充分混匀，此为10000倍稀释液）再加上一定量的水作为制备的阳性对照（加水后其总体积跟样品一样，样品体积多少取决于所用试剂盒的要求）。可以用水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品RNA。

2.用自选方法纯化N+2个样品的RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒RNA提取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送20次核酸释放剂试用装，

二、设置RT-PCR反应（20μL体系）

3.如果有N+2个样品，则标记N+4个PCR管（额外增加的两个管一个是RT-PCR阳性对照，另一个是RT-PCR阴性对照）并按照下表在PCR管中加入下列成分：

成份 N+2个样品管 RT-PCR阴性对照 RT-PCR阳性对照

5×双酶一管式RT-PCR Buffer 各4 μL 4 μL 4 μL

基孔肯尼雅病毒RT-PCR

引物混合液 各2 μL 2 μL 2 μL

N+2个制备的样品 各12.5 μL 不加 不加

基孔肯尼雅病毒 RT-PCR阳性对照

10000倍稀释液 不加 不加 12.5 μL

MMLV-Taq Mix 1.5 μL 1.5 μL 1.5 μL

4.上机进行RT-PCR，RT-PCR反应参数为:

过程 温度 时间

逆转录 42℃ 30分钟

预变性 95℃ 5分钟

PCR反应

（40个循环） 93℃ 45秒

55℃ 120秒

延伸 72℃ 5分钟

5.琼脂糖电泳检测扩增效果，阳性样品预期得到的扩增产物长度为270bp。如果阴性对照有此扩增产物或阳性对照无此扩增产物，则说明实验失败，需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有此扩增产物、阳性对照有此扩增产物的情况下，才有必要分析样品的实验结果，如果有此扩增产物则为阳性，如果无则为阴性。