骆驼痘病毒染料法荧光定量PCR试剂盒

骆驼痘病毒染料法荧光定量PCR试剂盒

英文名称：Camel Pox Virus(CPV

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-3周

其他： 

产品介绍：

产品及特点 骆驼痘病毒(Camel Pox Virus，CPV) 是一种存在于上皮细胞屑中的病毒，能够引发以体表无毛处皮肤痘疹，能够使上呼吸道、口腔和食管部黏膜形成纤维素性坏死假膜。该病毒对外界是环境的抵抗力相当强，在上皮细胞屑中的病毒，虽然完全干燥和被直射日光作用许多星期，还不致被杀死；加热至 60℃需经 3 小时才被杀死，在-15℃以下的环境中可保持活力多年。1%的火碱、1%的醋酸或 0.1%的升汞可于 5 分钟内杀死此病毒，较强的抵抗力对骆驼健康有巨大的潜在危害，因此骆驼痘病毒的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用，为此本公司开发了简单快捷的骆驼痘病毒染料法

荧光定量 PCR 检测试剂盒，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供病毒样品。

2. 根据骆驼痘病毒保守序列设计的专一性引物，与相关病毒无交叉反应。

3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。

4. 一管式荧光定量 PCR 检测，避免后续污染。

5. 本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。

6. 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。 

运输及保存 低温运输、-20℃保存，有效期一年。

自备试剂 DNA 模板、10×ROX（根据机型决定，具体见使用方法）。

使用方法 一、稀释 PCR 阳性对照（以 www.tiandz.com通过搜索产品名称一管式病毒DNAout或产品编号3674下载。

三、设置 qPCR 反应（20 μL 体系，在样品制备室进行）

10. 如果只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个 样品，1 个用于 PCR 阴性对照，6 个用于 PCR 阳性对照。如果做 2-3 次重复，则 反应设置数量相应增加 2 或 3 倍。

11. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕 后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加）： 成分 样品管 N+2 个 PCR 阴性 对照管 PCR 阳性 对照管（2-7 管） 2×qPCR MagicMix （棕色管） 10 μL 10 μL 各 10 μL 骆驼痘病毒 PCR 引物混合液（白盖） 2 μL 2 μL 各 2 μL 自备 10×ROX (见注) 2 μL 2 μL 各 2 μL N+2 待测样品 DNA 模板 6 μL 不加 不加 第 7 步所得 PCR 阳性对照 稀释液（2-7 号） 不加 不加 各 6μL（2 号样到 2 号管，3 号样到 3 号管…）

注:仅 ABI7500、7700 和 7900 仪器需要使用 ROX 作为对照，其他荧光 PCR 仪 器（如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene 3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480）不需要使用 ROX，则用水替代。

12. 盖上盖子后上机，按下面参数进行 PCR（具体 PCR 参数可以根据仪器不同而自行 优化）。 过程 温度 时间 预变性 94℃ 5 分钟 PCR 反应 （30 个循环） 94℃ 60 秒 56℃ 60 秒 74℃ 60 秒

13. 数据采集 具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合 DNA 时， 最大吸收光谱在 471 nm，结合 DNA 时的最大吸收光谱在 500 nm，最大发射光 谱在 530 nm。信号采集可以设置在复性或延伸步骤。

四、数据处理 1

4. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵 轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 DNA 浓度的 log 值，再推算出其浓度。

15. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照 Ct 必须大于或等 于 40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该小于或等于 30。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性，如果小于或等于 35 则为 阳性。如果在 35-40 之间，则重复一次。重复实验的 Ct 值如果大于或等于 40 则 为阴性，如果小于 40，则为阳性。