对虾杆状病毒PCR试剂盒

对虾杆状病毒PCR试剂盒

英文名称：Baculovirus Penaei(BP)

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产品介绍：

产品及特点

对虾杆状病毒(Baculovirus Penaei)是一种能在细胞核内产生金字塔状的包涵体的病毒，会引起对虾的肝胰腺或中肠上皮细胞核内由于感染多角体杆状病毒而引起的多种对虾的急性传染病。除了死亡特征外，受BP感染的虾也表现为摄饵减少，生长速度降低，虾体表面因附生或共栖生物增多而出现烂鳃或细菌的混合感染等非特定症状，对野生对虾资源有巨大危害，因此快速检测对虾杆状病毒具有重要意义。本产品具有下列特点：

1.即开即用，用户只需要提供病毒DNA模板。

2.引物经过精心优化，专一性强，只扩增对虾杆状病毒，与其他病毒没有交叉反应。

3.提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4.PCR mix中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。

本试剂盒足够做40μL体系的PCR 50次，但只能用于科研。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其

他试剂。

自备试剂 样品 DNA。

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 枯草芽孢杆菌PCR 阳性对照的 10000 倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为 PC。另外用水作为 NC。

2. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数细菌 DNA 提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的细菌 DNAout 或柱式细菌 DNAout。核酸释放剂（试用装） 61202 20次（1 mL，绿盖）

二、设置 PCR 反应（40 μL 体系）

3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分

N+2 个

样品管

PCR 阴性

对照

PCR 阳性

对照

PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL

枯草芽孢杆菌 PCR 引物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL

N+2 个样品 DNA 模板 各 18 μL - -

样品制备阴性对照 - 18 μL -

样品制备阳性对照（用 10μL 枯草

芽孢杆菌PCR阳性对照的10000

倍稀释液）

- - 18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：过程 温度 时间

预变性 94℃ 5 min

PCR 反应

（30 个循环）

94℃ 30 sec

52℃ 30 sec

72℃ 30 sec

最后延伸 72℃ 10 min

三、电泳检测

5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR产物长度为 460 bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。