牛赤羽病毒RT-PCR试剂盒

牛赤羽病毒RT-PCR试剂盒

英文名称：Akabane Disease Virus(AKAV)

运输：低温

保存：负20度

有效期：一年

货期：2-3周

其他： 

产品介绍：

产品及特点

牛赤羽病毒(Akabane Virus，AKAV) 会引起赤羽病，又称阿卡班病，是牛、 羊的一种以流产、早产、死胎、胎儿畸形、木乃伊、新生胎儿发生关节弯曲积水 性无脑综合症为特征的病毒性传染病。特征性的表现是妊娠牛异常分娩，多发生 于怀孕 7 个月以上或接近妊娠期满的牛。感染初期胎龄越大的胎儿早产发生的越 多，中期发生难产，即使顺产，新生犊也不能站立。后期多产出无生活能力的犊 牛或瞎眼的犊牛。该病毒会给养殖业带来较大的经济损失，因此灵敏快捷的诊断 产品具有重要的意义。为此本公司开发了本产品，可用于在科研领域快速定量检 测牛赤羽病病毒。它具有下列特点：

1. 一站式，用于不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。

2. 根据牛赤羽病毒的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。

3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。

4. 使用一管式 RT-PCR 技术，RT 和 PCR 两步在一个试管内完成，不需要中间 转移样品，降低了操作误差和可能的污染。

5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR。

6. 本产品只能用于科研，不能用于临床。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分

分开放置，因为其容易污染其他成分，造成假阳性。

自备试剂 样品 RNA

使用方法 一、样品 RNA 的制备

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 牛赤羽病毒 PCR 阳性对照的 10000 倍稀释的（稀释后浓度为 1×10E4 拷贝/μL，10μL 相当于

1 万拷贝，可以将 10μL 原液加入到 990μL 自备 TE 溶液中，充分混匀，此

为 100 倍稀释液。再取 10μL 此稀释液加入到 990μL 自备 TE 溶液中，充分

混匀，此为 10000 倍稀释液）再加上一定量的水作为制备的阳性对照（加水

后其总体积跟样品一样，样品体积多少取决于所用试剂盒的要求）。可以用水

作为制备的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。

2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 20 次核酸释放剂试用装，

二、设置 RT-PCR 反应（20μL 体系）

3. 如果有 N+2 个样品，则标记 N+4 个 PCR 管（额外增加的两个管一个是RT-PCR 阳性对照，另一个是 RT-PCR 阴性对照）并按照下表在 PCR 管中加入下列成分：

成份 N+2 个

样品管

RT-PCR

阴性对照

RT-PCR

阳性对照

5×双酶一管式 RT-PCR Buffer 各 4 μL 4 μL 4 μL牛赤羽病毒 RT-PCR 引物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μLN+2 个制备的 RNA 样品 各 12.5 μL 不加 不加超纯水 不加 12.5 μL 不加

牛赤羽病病毒 RT-PCR 阳性对照

的 10000 倍稀释液

不加 不加 12.5 μL

MMLV-Taq Mix 1.5 μL 1.5 μL 1.5 μL

4. 上机进行 RT-PCR，RT-PCR 反应参数为:

过程 温度 时间

逆转录 42℃ 60 分钟

预变性 95℃ 5 分钟

PCR 反应

（35 个循环）

95℃ 30 秒

58℃ 30 秒

72℃ 30 秒

延伸 72℃ 10 分钟

5. 琼脂糖电泳检测扩增效果，阳性样品预期得到的扩增产物长度为 720bp。如果阴性对照有此扩增产物或阳性对照无此扩增产物，则说明实验失败，需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有此扩增产物、阳性对照有此扩增产物的情况下，才有必要分析样品的实验结果，如果有此扩增产物则为阳性，如果无则为阴性。