毕赤酵母GS115菌种

毕赤酵母GS115菌种

英文名称：Pichia pastoris Strain GS115 

运输：低温

保存：-80度

有效期：3年

货期：现货

其他： 

产品介绍：

产品及特点

GS115 是毕赤酵母菌株，属于真核细胞。一般的针对原核生物的抗生素 例如卡那和氨苄对酵母是无效的，因此为了防止大肠杆菌等原核生物对酵母培 养菌株污染，往往会在培养基中加入一些氨苄和卡那霉素的抗生素，来抑制细 菌的污染和生长。GS115 毕赤酵母自身表型为 Mut+，但是 GS115 转化株既 能够产生出 Mut+菌株，也能够产生出 Muts 菌株。目的蛋白在这两种转化株 的表达水平可能是不同的，并且具有不可预测性，所以只有通过实验才能得到 最好的酵母表达方案。

毕赤酵母适宜的生长温度是 28 至 30 度，温度超过 32 度对蛋白的表达 是有害的，并可能导致细胞的死亡。GS115 毕赤酵母是是组氨酸缺陷型（His4 基因型），如果表达载体上携带有组氨酸基因，可补偿宿主菌的组氨酸缺陷， 因此可以在不含组氨酸的培养基上筛选转化子。这些受体菌自发突变为组氨酸 野生型的概率一般低于 10 8。GS115 毕赤酵母可以在 YPD 培养基中生长， 或者在补充有组氨酸的 minimal media 中生长，但是无法在单独的 minimal media 培养基中生长。

本菌株的基因型为 His4，表型是 Mut+。

运输及保存 低温运输，-80℃保存，有效期一年。

自备试剂 YPD 培养基、山梨醇、超纯水等

使用方法

质粒转化毕赤酵母 GS115 的菌株的方法有很多，如电转化、化学转化等。 根据实验方法的不同，用的试剂和培养基有所不同。本手册提供一个电转化方 法。

1. 挑取酵母单菌落，接种至含有 5 mL YPD 培养基的 50 mL 三角瓶中， 30℃，250-300 r/min 培养过夜；

2. 取 100-500 µL （≤1:100）的培养物接种至含有 50 mL 新鲜培养基的 200 mL 三角摇瓶中，28~30℃，250-300 r/min 培养过夜(约 20 小时)， 至 OD600 达到 1.3~1.5；

3. 将细胞培养物于 4℃，1500g 离心 5 分钟，用 50 mL 的冰预冷的无菌水 将菌体沉淀重悬；

4. 按步骤 3 离心，用 25 mL 的冰预冷的无菌水将菌体沉淀重悬；

5. 按步骤 3 离心，用 2-5 mL，1M 的冰预冷的山梨醇溶液将菌体沉淀重悬；

6. 按步骤 3 离心，用 160 µL 的冰预冷的 1M 的山梨醇溶液将菌体沉淀重悬， 其终体积约为 240 uL；

7. 将 5~20 µg 的线性化 DNA 溶解在 5~10 µL TE 溶液中，与 80 µL 的上 述步骤 6 所得的菌体混匀，转至 0.2 cm 冰预冷的电转化杯中；

8. 将电转化杯冰浴 5 分钟；

9. 根据电转化仪提供的资料，参考其他文献及多次摸索，确定合适的电压、 电流、电容等参数，按优化的参数，进行电击（推荐：电压 1.5 kV ；电 容 25 µF ；电阻 200 Ω；电击时间为 4 ～10 msec）。

10. 电击完毕后，马上加入 1 mL 1M 的冰预冷的山梨醇溶液将菌体混匀，转 至 1.5 mL 的 EP 管中，置于 30℃摇床低速培养 1 小时；

11. 将菌体悬液涂布于 MD 平板上，每 200~600 µL 涂布一块平板；

12. 将平板置于 30℃倒置培养，直至单个菌落出现（3-4 天）。