包涵体中量纯化试剂盒

包涵体中量纯化试剂盒

英文名称：Inclusion Body Midi Isolation Kit

运输：常温

保存：常温

有效期：1年

货期：1-2天

其他：

产品介绍：

中量提取包涵体

产品及特点

本产品是天泽基因包涵体微量纯化试剂盒（CAT#：90508）的中量提取升 级产品，用于中量，快速的提取高质量的包涵体。它具有下列特点：

1. 中量提取，一次可以处理 30-50 mL 的菌液，一次中量提取相当于 10-20 次 微量提取。

2. 操作简单快速，整个过程只要四十分钟左右。

3. 大规模提取，可以在 15-50 mL 离心管中完成。

4. 能有效去除包涵体中的细胞壁和细胞膜等非重组蛋白成份，使重组蛋白所占 比重达到 60%以上。

5. 细胞裂解通过非离子洗涤剂的化学裂解法，裂解更加温和。 6. 得到的包涵体可以用于重折叠。

运输及保存 常温运输及保存，但溶菌酶和 Benzonase 需要低温运输，-20℃保存，有效期一

年。 自备试剂 无

使用方法 准备工作：

将 3 g 溶菌酶全部加入到 25 mL 溶液 A 中溶解，然后根据每次的需要量（一次大量提取需要

3. 加入 5 mL 含溶菌酶的溶液 A 重悬细胞。

4. 室温放置 10-20 分钟裂解细菌，其间可以用手轻弹离心管混匀。

5. -20℃冷冻至凝固。凝固有利于裂解细菌，所以一定要凝固到细菌溶液变成固体。

6. 室温水浴解冻。如果裂解充分，细菌释放出的 DNA 将使裂解物十分粘稠。如果不粘稠，说明裂解不充分，需要重复 3-6 步，否则完整细菌将和包涵体一起沉淀，影响包涵体的纯度。如有条件最好在显微镜下检查细菌是否充分裂解。

7. 加入 25 uL 的 Benzonase （1U/uL），脱色摇床上摇晃直到裂解液不再粘稠，一般需要 30 分钟左右（检查方式是将裂解物倾倒转移到另一离心管中，在转移过程中看其是否粘稠）。

8. 5,000-7,000 rpm 4℃离心 5 分钟，小心收集上清。上清含有以可溶形式存在的重组蛋白，可以保留作为 SDS-PAGE 对照样品。

9. 将沉淀（主要由包涵体构成）悬浮在 25 mL 的溶液 B 中，轻柔混匀后室温放置 5 分钟。

10. 5,000-7,000 rpm 4℃离心 10 分钟，小心收集上清,可以作为包涵体第一次洗涤的对照样品。

11. 将沉淀（主要由包涵体构成）悬浮在 25mL 的溶液 B 中，轻柔混匀后室温放置 5 分钟。

12. 5,000-7,000 rpm 4℃离心 10 分钟，小心收集上清作为包涵体第二次洗涤的对照样品。一般洗涤两次就能够得到足够纯净的包涵体，如果需要更多洗涤，需要用户单独购买包涵体洗涤液（溶液 B）。

13. 得到的沉淀即为包涵体，可以长期放置在冰箱待用或直接进入包涵体的溶解

步骤。 二．包涵体的溶解：

1. 在包涵体沉淀中加入 5 mL 包涵体溶解液，用枪头充分吹打后漩涡震荡。如果低温放置，包涵体溶解液会产生沉淀，必须 45-65℃溶化并混匀后才能使用。

2. 室温放置 1 小时使蛋白质充分溶解。

3. 20000g 4℃离心 20 分钟，小心收集上清，保留不溶性沉淀。注意：检查离心管能否承受此离心力。SDS-PAGE 检查是否大部分重组蛋白都在上清中。如果没有，说明包涵体没有完全溶解，需要用适当增加包涵体溶解液的用量。

4. 得到的蛋白质溶液可以用于复性等试验。由于不同的蛋白质有不同的最佳复性条件，所以本公司不能提供统一的复性溶液，需要用户自己摸索。注意：包涵体纯化过程中引入了溶菌酶、DNase 和 RNase 等外源蛋白质，在SDS-PAGE 分析时可能有额外条带出现。