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| 别名: | 加A试剂盒 | ||
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| 储存条件: | 低温运输，-20℃保存，有效期一年。 | ||
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| 储存条件: | 低温运输，-20℃保存，有效期一年。 |
加A试剂盒
英文名称：dA Tailing Kit
运输：低温
保存：负20℃
有效期：1年
货期：1-2天
其他：
产品介绍：
产品及特点
本产品利用 Taq DNA polymerase 的不依赖于模板的末端转移酶活性，在只有 dATP 存在的情况下，在平末端的 DNA 片段加上一个 dA 尾巴，使平末端片段也能被 T 载体克隆。
1. 简单，2 X Tailing Buffer 中含有所需要的所有成分,不需要单独准备。
2. 适用于任何平末端的 DNA 片段，包括 Pfu DNA polymerase 等酶合成的 DNA 片段。
3. 产物可以直接用于与 T 载体的连接。
运输及保存 低温运输，-20℃保存，有效期一年。
自备试剂 PCR 片段、超纯水
使用方法 一：反应前纯化处理：
用 Vent, Deep Vent, Pfu, Pwo 等具有 3 到 5 外切活性的 DNA 聚合酶扩增得到的 DNA 片段，必须经过彻底的去除残留的酶的处理过程（如酚/氯仿抽提或 Proteinase K 处理），否则它们将在加 A 反应时，切除掉加上的 尾巴，干扰反应。可以采取胶回收和酚/氯仿抽提法等常规方法纯化，最后溶解在水或 TE 中，终浓度以 0.1 ug/uL 为宜。
二：加 A 反应
在干净的 0.5 mL 或 1.5 mL 离心管中，分别加入下列成分：
回收的 DNA 片段(0.2-2 ug)
25 uL 2 X dA Tailing Buffer
1 uL Taq DNA polymerase（5 U/uL）
补水到 50 uL 后 72℃保温 2 小时
三：反应后处理
加 A 反应后，Taq DNA polymerase 将与 DNA 末端紧密结合，所以必须酚/氯仿抽提去除。如果使用 Proteinase K 处理后再用酚/氯仿抽提效果会更好。得到的 DNA 溶于适量水和 TE 中后即可用于 T 载体的连接反应。
