miRNA cDNA第一链合成试剂盒

miRNA cDNA第一链合成试剂盒

英文名称：miRNA First Strand cDNA Synthesis Kit

运输：低温

保存：负20℃

有效期：1年

货期：1-2天

其他：

产品介绍：

合成miRNA的第一链cDNA

产品及特点

本试剂盒采用在 miRNA 3’末端加多聚 A 尾的方法来使 miRNA 具有 Poly(A)

尾，之后再使用 Oligo(dT)-Tag 引物进行逆转录反应，最终合成 miRNA 对应的第

一链 cDNA。其反应流程如下：

本产品具有如下特点：

1. 两步式操作，先进行 Poly(A)加尾，再进行逆转录反应。

2. 只需要 1 ug 的 total RNA。

3. 所得 cDNA 可用于检测多种 miRNA，不仅减少了误差、节约了样品，同时还

实现了检测的高通量。

4. 与 miRNA 荧光定量 PCR 检测试剂盒兼容。

5. 特异性好，独特的 miRNA 引物及反应体系避免了 Pre-miRNA 的非特异扩增。

运输及保存 低温运输，-20℃保存

使用方法 一、对 miRNA 3' 末端进行加 Poly (A)处理

1. 在冰上预冷 RNase-Free 的反应管内加入以下试剂至总体积 20 uL。注意需要

最后加入 E.coli Poly(A)聚合酶。

试剂组分 体积

自备的 Total RNA（见注） 1 ug

10× Poly(A)聚合酶反应液 2 uL

ATP 溶液，1mM 2 uL

RNase-Free 水 补水至 20 uL

E.coli Poly(A)聚合酶(5 U/ uL) 0.4 uL（2U）

注：在反应中使用的 Total RNA 必须含有 miRNA。也可以直接使用 miRNA

（建议加入量为 2–5uL，需根据目的 miRNA 的丰度决定）。

2. 移液器轻轻混匀上述配制的反应液，短暂离心后在 37℃反应 60 min。所得的

反应液可以直接进行下游实验（注意：只能把 2uL 直接用于后续的 RT 反应，

多于 2uL 则需要先乙醇-乙酸钠沉淀，再将加尾后的 miRNA 溶于水，然后再

取所需量用于 RT。如果不经过沉淀，带入的残留的 poly（A）聚合酶反应液将

会干扰 RT 反应），也可以放置-20℃短暂保存。如需长期保存建议存放于-80℃。

二、对带 Poly (A)尾巴的 miRNA 进行逆转录反应

3. 按照下表设置 20 uL 体系的 RT 反应：

成分 体积

Poly(A) 反应产物（来于上步） 2 uL

RNase-Free 水 10 uL

Oligo（dT）-Tag 引物 1 uL

4×RT Buffer（含 dNTP） 5 uL

MMLV 逆转录酶（含 RI） 2 uL

4. 移液器轻轻混匀上述配制的反应液，短暂离心后在 42℃反应 60 min。

5. 70℃保温 10 min 终止反应。

6. 合成的 cDNA 反应液可放置于-20℃保存；也可以暂时冰上放置，立即用于后

续的荧光 PCR 定量检测，不需要纯化。