柱式粪便DNAout

柱式粪便DNAout

英文名称：Column Stool DNAOUT 

运输：常温

保存：常温

有效期：1年

货期：1-2天

其他：

产品介绍：

柱式法提取粪便总DNA，包括肠道细胞和微生物

产品及特点

本产品是动物粪便 DNAout（CAT#：70601）的柱式升级产品，专门用于从各种动物粪便中快速提取高质量的 DNA。跟动物粪便 DNAout，它具有下列特点：

1. 操作更加简单快速，一个样品只需要十多分钟的时间。

2. DNA 更加纯净，OD260/280 一般都在 1.8 以上，得到的 DNA 样品原液或稀释液可以直接用于 PCR 扩增。

3. 每次微量提取可以处理 100-300mg 左右的样品，能得到 5 ug 左右 DNA，片段长度在 30 Kb 左右。

4. 可以同时提取到肠道上皮细胞和可能的肠道病原菌的 DNA。

5. 试剂无毒无害, 环保。

运输及保存 常温运输及保存，有效期一年。

自备试剂 氯仿。

使用方法 

1. 65℃预热溶液 A，待其沉淀溶化后充分混匀，取 0.5 mL 加入到 1.5 mL 塑料离心管中并放置于 65℃待用。

2. 称取 0.1-0.3 g 的粪便，加入到含预热溶液 A 的离心管中，震荡器上剧烈震荡5-10 分钟。如果是扩量操作，可以使用更多粪便和较大离心管。也可以将同一种粪便在较大离心管中震荡处理，然后再分到 1.5 mL 离心管中。注意:不论使用大的还是小的离心管，一定要让管底的粪便震荡起来。

3. 将离心管置于 65℃水浴中保温至少 5 分钟。

4. 12000-15000 g 室温离心 3 分钟，将上清转移到一新离心管中(上清液一般呈淡黄色或深棕色，实际颜色随样品而异，上清液的体积一般为 300-400 µL)。

5. 在上清液中加入等体积的溶液 B，上下颠倒 30 秒充分混匀，溶液将呈白色或淡黄色混浊状。

6. 将离心管冰浴至少 5 分钟。 

7. 12000-15000 g 室温离心 3 分钟，转移上清到新的 1.5 mL 离心管中，上清液颜色将比第 4 步得到的上清的颜色稍淡，体积在 0.7 mL 左右。

注意：下面第 8-第 9 步的氯仿抽提操作可以省略，直接进入第 10 步，但 DNA 的产量会低 50%左右，OD260/280 在 1.7-1.8。如果直接进入第 10 步，则转移的溶液体积不要超过 0.6 mL，否则没有空间加溶液 C。

8. 加入 0.2 mL 的氯仿(自备)，震荡器上充分振荡 30 秒混匀。注意:一定要让管底的溶液震荡起来。

9. 12000-15000 g 室温离心 3 分钟，小心转移上清到新离心管中。说明：离心后两相交界面将有白色膜状物，其中有机相部分颜色较深，一般呈淡棕色。将0.5 mL 上清转移到新的 1.5 mL 离心管中。如果有多余的可以弃之不用。

10. 加入 0.8 mL 的溶液 C，上下颠倒 30 秒混匀。

11. 分两次上柱（即先转移一半的混合液到离心吸附柱中，12000-15000 g 室温离心半分钟，弃穿透液，然后再将剩下的混合液到离心吸附柱中，12000-15000g 室温离心半分钟，弃穿透液）。

12. 加 0.7 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，12000-15000 g 室温离心半分钟，弃穿透液。

13. 如果有必要，可以再加 0.3 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，12000-15000 g室温离心半分钟，弃穿透液。增加一步洗涤能使最后得到的 DNA 的纯度稍有提高，但产量稍微有所降低。

14. 12000-15000 g 室温再离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会污染 DNA。

15. 将离心吸附柱转移到一新的 1.5 mL 塑料离心管中，加入 50-100 uL DNA 洗脱液 2.0。

16. 室温放置离心吸附柱 1-2 分钟。

17. 12000-15000 g 室温离心半分钟，离心管中溶液即为 DNA 样品，可以立即使用或存放于冰箱待用。